1.綜述
鹽酸莫西沙星是拜耳公司開(kāi)發(fā)的第四代新型8-甲氧基氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物，具有抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、交叉耐藥少、光毒性低、藥物相互作用少、生物利用度高、組織穿透力好等特點(diǎn)。最早于1999年6月在德國(guó)獲批上市，并于2002年8月獲批進(jìn)口中國(guó)。截至2011年5月，鹽酸莫西沙星片已在包括上述國(guó)家在內(nèi)的127個(gè)國(guó)家和地區(qū)獲得批準(zhǔn)。
鹽酸莫西沙星結(jié)構(gòu)如下：
鹽酸莫西沙星合成工藝路線如下：
從結(jié)構(gòu)來(lái)看主要由兩個(gè)片段組成，片段一為(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷（CAS：151213-40-0），作為本品合成的起始原料之一；合成路線如下：
片段二為8-甲氧基氟喹諾酮類(lèi)結(jié)構(gòu)，以1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯（CAS：112811-71-9）起始原料反應(yīng)制得，其合成路線如下：
2.起始原料選擇依據(jù)
在原料藥研究DMF備案中，起始原料選擇依據(jù)尤為重要，會(huì)影響到API注冊(cè)的風(fēng)險(xiǎn)，依據(jù)ICHQ11原則，確定起始原料，如下：
1）起始原料A和B為原料藥API關(guān)鍵結(jié)構(gòu)片段，可以通過(guò)有效手段進(jìn)行鑒別。
2）兩個(gè)起始原料A和B質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合理建立，相關(guān)雜質(zhì)的控制及限度制定依據(jù)合理，滿足可持續(xù)生產(chǎn)出合格原料藥。
3）原料藥有手性中心引入是來(lái)源于起始原料A和B，其中異構(gòu)體雜質(zhì)的控制可優(yōu)先采取源頭控制策略。
4）對(duì)原料藥藥典規(guī)定的雜質(zhì)，需確定其產(chǎn)生機(jī)理，并對(duì)產(chǎn)生該雜質(zhì)的源頭進(jìn)行合理控制，加標(biāo)確定合適的質(zhì)控限度，確保生產(chǎn)的原料藥符合要求。
5）工藝路線一般要求工藝路線要求至少3步化學(xué)鍵合反應(yīng)，在滿足注冊(cè)要求的前提下，確保起始原料選擇的合理性。
6）對(duì)于外購(gòu)原料A和B，嚴(yán)格按供應(yīng)商確認(rèn)程序進(jìn)行審計(jì)和資質(zhì)確認(rèn)，要求供應(yīng)商對(duì)起始原料質(zhì)量可能產(chǎn)生影響的任何工藝變更及時(shí)通知申報(bào)方，降低未來(lái)工藝變更可能對(duì)原料藥質(zhì)量造成影響的風(fēng)險(xiǎn)，并定期對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行全面的質(zhì)量審計(jì)，保證其生產(chǎn)的原料持續(xù)符合質(zhì)量要求。
選擇起始原料應(yīng)考慮上述全部原則，而不是孤立的嚴(yán)格遵循單個(gè)原則。
3.起始原料分析方法建立關(guān)鍵點(diǎn)
3.1起始原料：(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷
3.1.1雜質(zhì)分析
3.1.2研究思路
1）有關(guān)物質(zhì)方法：主要檢測(cè)雜質(zhì)-0B、雜質(zhì)-0C、雜質(zhì)-0D與未知雜質(zhì)，采用HPLC法。
2）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅱ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H，此兩雜質(zhì)在有關(guān)物質(zhì)條件下出峰較早，干擾測(cè)定，單建方法進(jìn)行檢測(cè)。其中雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H極性極大，采用常規(guī)C18色譜柱基本沒(méi)有保留；雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H結(jié)構(gòu)中均含有N原子，在酸性的流動(dòng)相條件下，這兩個(gè)化合物帶正電荷，此時(shí)采用含有庚烷磺酸鈉的流動(dòng)相時(shí)，帶正電的兩個(gè)化合物會(huì)和帶負(fù)電的庚烷磺酸鈉基團(tuán)形成靜電作用，從而保留增強(qiáng)。
3）異構(gòu)體：雜質(zhì)-0A為對(duì)映異構(gòu)體，采用柱前手性衍生試劑GITC進(jìn)行衍生方法檢測(cè)。
4）雜質(zhì)-0G：采用陽(yáng)離子交換色譜柱進(jìn)行檢測(cè)；
5）雜質(zhì)-0E：為酒石酸，采用HPLC法進(jìn)行檢測(cè)。
3.1.3 檢測(cè)方法優(yōu)化思路
流動(dòng)相加入離子對(duì)試劑庚烷磺酸鈉時(shí)，離子對(duì)試劑極易吸附在普通色譜柱填料的活性位點(diǎn)上，難以洗脫下來(lái)，導(dǎo)致色譜柱死體積增加，保留時(shí)間提前，理論塔板數(shù)降低，分離度變差的情況，這個(gè)吸附過(guò)程是不可逆的，因此在選擇色譜柱的時(shí)候需要格外注意。選擇島津Shim-packScepterC18色譜柱，此款色譜柱采用新開(kāi)發(fā)的有機(jī)硅烷層與無(wú)機(jī)硅烷層多層結(jié)構(gòu)的混合型顆粒，既保持了無(wú)機(jī)硅烷的高機(jī)械強(qiáng)度，也極大的提高了強(qiáng)酸堿的耐受性（pH1.0~12.0）。同時(shí)運(yùn)用微反應(yīng)器造粒技術(shù)和多級(jí)端基封尾技術(shù)，保證了可以長(zhǎng)期耐受離子對(duì)試劑流動(dòng)相。
分析方法：
色譜柱:Shim-packScepterC18-120（5μm，4.6×250mm）PN：227-31020-06；SN：106YA80292
柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μl；供試品濃度：1mg/min；
流動(dòng)相A：0.02mol庚烷磺酸鈉溶液（磷酸調(diào)pH至2.9）
流動(dòng)相B：乙腈
稀釋劑：流動(dòng)相A
梯度洗脫程序：
說(shuō)明：色譜圖從上到下依次為雜質(zhì)E和雜質(zhì)F混合溶液、空白、其他雜質(zhì)混合溶液、供試品溶液。
結(jié)果：空白、其他雜質(zhì)均不干擾檢測(cè)；供試品中未檢出雜質(zhì)E和F。
3.2起始原料：1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯
3.2.1雜質(zhì)分析
3.2.2研究思路
1）有關(guān)物質(zhì)方法：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1A、雜質(zhì)-1B、雜質(zhì)-1C、雜質(zhì)-1D、雜質(zhì)-1F、雜質(zhì)-1H、雜質(zhì)-1L與未知雜質(zhì)。
2）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅱ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1M與雜質(zhì)-1I；雜質(zhì)MXC-1M在原有關(guān)物質(zhì)條件下靈敏度不符合要求，雜質(zhì)MXC-1I與主峰重合，另新建方法進(jìn)行研究。
3）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅲ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1K，該雜質(zhì)紫外吸收較弱，采用GC-MS進(jìn)行研究，在后續(xù)步驟中控制。
4）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅳ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1J，為致突變雜質(zhì)，紫外吸收較弱，結(jié)構(gòu)中有醛基，采用2,4-二硝基苯肼衍生進(jìn)行研究。
5）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅴ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1G和雜質(zhì)-1O，均為致突變雜質(zhì)，靈敏度較低，單獨(dú)進(jìn)行研究。
6）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅵ：主要檢測(cè)雜質(zhì)-1E，為致突變雜質(zhì)，采用GC方法單獨(dú)進(jìn)行研究。
3.2.3 檢測(cè)方法優(yōu)化思路
由于目標(biāo)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似，極性差異小，需要選擇島津Shim-packScepterHD-C18色譜柱進(jìn)行分離，Shim-packScepterHD-C18填料為為聚合型鍵合，立體選擇性較強(qiáng)，適合分離結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物。
分析條件：
色譜柱：Shim-packScepterHD-C18-80（5μm,4.6×250mm）PN：227-31024-06；SN：127YA90057
柱溫40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μl；供試品濃度：1mg/min
流動(dòng)相A：0.02mol磷酸二氫鉀溶液
流動(dòng)相B：甲醇-乙腈（70:30）
稀釋劑：0.2%磷酸-甲醇（45：55）溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.3）
梯度洗脫程序：
系統(tǒng)適用性溶液
出峰順序：雜質(zhì)A、雜質(zhì)L、雜質(zhì)B、雜質(zhì)D、雜質(zhì)C、雜質(zhì)F（雜質(zhì)I）、主峰、雜質(zhì)G（雜質(zhì)N）、雜質(zhì)H、雜質(zhì)M。
說(shuō)明：峰8和峰7（主峰）的分離度大于1.5，其他雜質(zhì)不干擾主峰且和主峰的分離度大于1.5。
4.寄語(yǔ)
在仿制藥研發(fā)領(lǐng)域，起始原料選擇尤為重要，需參考ICHQ11制定合理的起始原料選擇依據(jù)，有助于減少返補(bǔ)風(fēng)險(xiǎn)；對(duì)于雜質(zhì)研究，選擇合理的控制策略，有助于注冊(cè)風(fēng)險(xiǎn)的降低；對(duì)于分析方法的建立，從各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，分批合理制定雜質(zhì)研究思路；對(duì)于特殊的雜質(zhì)研究，選擇合理的色譜條件及色譜柱，能有助于快速開(kāi)發(fā)出合理的檢測(cè)方法。
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該中心不僅研發(fā)技術(shù)團(tuán)隊(duì)高度專(zhuān)業(yè)化，檢測(cè)技術(shù)和藥物研發(fā)經(jīng)驗(yàn)豐富，而且有非常強(qiáng)大的業(yè)界知名專(zhuān)家組成的顧問(wèn)團(tuán)隊(duì)，以及與島津和賽默飛儀器公司建立的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，可以使用世界上最先進(jìn)的儀器設(shè)備，為藥物研發(fā)企業(yè)提供專(zhuān)業(yè)、精準(zhǔn)、快速的檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。
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