自一致性評價(jià)工作開展以來，生物等效性（BE）試驗(yàn)在仿制藥開發(fā)過程中具有非常重要的地位。自研品和參比制劑能否實(shí)現(xiàn)生物等效，除制劑本身的質(zhì)量差異外，BE 試驗(yàn)的設(shè)計(jì)也尤為重要。
BE 試驗(yàn)在設(shè)計(jì)過程中，需要考慮的因素有受試者人群、樣本量、采血點(diǎn)、清洗期、餐食等，其中樣本量的設(shè)定不僅關(guān)系到整個(gè)試驗(yàn)的成敗，同時(shí)涉及到費(fèi)用和成本問題，具體選取樣本量的合適值取決于藥物的個(gè)體內(nèi)變異情況。
根據(jù) CDE 頒布的指導(dǎo)原則，生物等效性（BE）的定義為：在相似的試驗(yàn)條件下單次或多次給予相同劑量的試驗(yàn)藥物后，受試制劑中藥物的吸收速度和吸收程度與參比制劑的差異在可接受范圍內(nèi)。
大部分 BE 試驗(yàn)采用交叉設(shè)計(jì)，意味著每個(gè)受試者都會服用自研品和參比制劑，同一受試者在不同時(shí)期服用制劑產(chǎn)生的差異，被稱為個(gè)體內(nèi)變異。
以PASS軟件計(jì)算樣本量為例，介紹個(gè)體內(nèi)變異對于樣本量設(shè)計(jì)的影響。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)為：交叉、兩制劑、兩周期；假設(shè)檢驗(yàn)的顯著性水平（Alpha）設(shè)置為 0.05，試驗(yàn)設(shè)計(jì)的把握度（Power）為 0.8，T/R 比值設(shè)定為 0.95，等效界值設(shè)定為 80.00%-125.00%，分別以個(gè)體內(nèi)變異為 15% 和 30% 為例，進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果如下：
個(gè)體內(nèi)變異為30%，計(jì)算樣本量如下表：
總結(jié)：當(dāng)個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)為 15% 時(shí)，軟件計(jì)算所得的樣本需求量為 15 例，而當(dāng)體內(nèi)變異系數(shù)為 30% 時(shí)，軟件計(jì)算所得的樣本需求量為 52 例，由此可知：如果一個(gè)品種個(gè)體內(nèi)變異越高，滿足生物等效性標(biāo)準(zhǔn)所需的受試者樣本量就越大。
個(gè)體內(nèi)變異的高低，我們通常可以從 FDA、歐盟、澳大利亞審評報(bào)告中獲得。如審評報(bào)告中沒有查到相關(guān)信息，我們也可以嘗試通過其他信息進(jìn)行分析。
結(jié)合我公司開展生物等效性的經(jīng)驗(yàn)以及對數(shù)據(jù)的分析，小編認(rèn)為造成藥物個(gè)體內(nèi)變異較高的主要原因有以下幾點(diǎn)。
若藥物在整個(gè)生理 pH 條件下飽和溶解度的檢測結(jié)果較低，則意味著藥物在胃腸道環(huán)境中溶解性較差，藥物不能充分溶解就會導(dǎo)致其吸收量偏低。
如奧美沙坦酯片，該原料藥溶解性具有顯著的 pH 依賴性，在酸性和堿性環(huán)境中溶解性較好，但在 pH2.0-pH4.0 介質(zhì)中幾乎不溶。受試者服用藥物后，若此時(shí)胃中 pH＜2.0 藥物尚且能夠逐漸溶解，但若胃中 pH＞2.0 時(shí)，藥物的溶解性就會顯著降低。另外，即使在胃中已溶解的部分藥物，當(dāng)從胃中轉(zhuǎn)運(yùn)至小腸的過程中，因 pH 值的變化，藥物會存在溶解—析出—再溶解的過程。
上述藥物的性質(zhì)導(dǎo)致了奧美沙坦酯片 Cmax、AUC 的個(gè)體內(nèi)變異均較高（ 20%-25% 左右）。
阿戈美拉汀片，審評報(bào)告中提及空腹?fàn)顟B(tài)下個(gè)體內(nèi)變異為 100% 左右。服用高脂餐后，個(gè)體內(nèi)變異還會繼續(xù)提高。
阿戈美拉汀原料藥溶解性和滲透性均較好，審評報(bào)告中將其分類為 BCSⅠ類。但該品種的絕對生物利用度僅有不到 5%，這是由于它具有廣泛的首過效應(yīng)，大量藥物在進(jìn)入體循環(huán)前就已被代謝。受試者服用藥物后，因每個(gè)時(shí)間段體內(nèi)環(huán)境不同，導(dǎo)致首過效應(yīng)的程度不同，使得藥物生物利用度受到影響，從而造成該品種個(gè)體內(nèi)變異較高。
類似品種還有阿托伐他汀鈣和阿奇霉素片，兩種原料藥溶解性較好，制劑在生理 pH1.2-6.8 介質(zhì)中均能完全溶出，但兩種制劑絕對生物利用度分別為 12%-14% 和 34% ，具有廣泛的首過效應(yīng)，導(dǎo)致兩個(gè)品種在體內(nèi)個(gè)體內(nèi)變異較高。
拉西地平片，原料藥溶解性很差，為提高溶解性，制劑在制備過程中將原料藥從結(jié)晶態(tài)轉(zhuǎn)化為無定型態(tài)，但即使這樣原料藥的溶解性依舊很差，且該藥物在肝臟中存在明顯的首過效應(yīng)，絕對生物利用度僅為 10% 左右。上述兩種原因，導(dǎo)致拉西地平片個(gè)體內(nèi)變異為 40%-60% 左右。
高脂餐能夠促進(jìn)或降低藥物溶解性，從而造成個(gè)體內(nèi)變異在空腹和餐后狀態(tài)下的差異。
如頭孢呋辛酯干混懸劑，食物的存在使胃腸道中水分減少，藥物溶解性降低，導(dǎo)致服用高脂餐后藥物吸收量不同程度地降低，出現(xiàn) Cmax 值變低、個(gè)體內(nèi)變異變高的情況。
而依西美坦片與之相反，餐后的個(gè)體內(nèi)變異較空腹?fàn)顟B(tài)下偏低。依西美坦原料藥為偏脂溶性，服用高脂餐后，膽汁分泌增多，膽酸離子具有表面活性劑作用，能夠增強(qiáng)脂溶性藥物的溶解，導(dǎo)致藥物在高脂餐條件下溶解性增加，溶解速度及程度的普遍提高會使得個(gè)體內(nèi)變異相應(yīng)降低。
如藥物在酸性介質(zhì)中容易降解，或在胃中溶解/吸收后易產(chǎn)生副作用，則需要設(shè)計(jì)成僅在腸道中釋放的藥物，即腸溶制劑。
腸溶制劑在體內(nèi)的溶解和吸收較普通口服制劑更易受到體內(nèi)環(huán)境的影響。受試者在服用藥物后，不同時(shí)期體內(nèi)環(huán)境不同，必然導(dǎo)致藥物在體內(nèi)的釋放和吸收的程度有所差異，加之自研品和參比制劑在本身質(zhì)量方面的差異，綜合導(dǎo)致腸溶制劑個(gè)體內(nèi)變異較高，如奧美拉唑腸溶膠囊、蘭索拉唑腸溶片、泮托拉唑鈉腸溶片和柳氮磺吡啶腸溶片。
為了提高 BE 試驗(yàn)的成功率，針對個(gè)體內(nèi)變異情況不同的品種，所對應(yīng)的BE方案設(shè)計(jì)便會有所不同。
一般采用兩制劑、單次給藥、交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)即可，等效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為 Cmax、AUC0-t、AUC0-∞，三個(gè)參數(shù)的 90% 置信區(qū)間為 80.00%-125.00% 。
可設(shè)計(jì)為部分重復(fù)（單制劑重復(fù)，即三周期）或完全重復(fù)（兩制劑均重復(fù)，即四周期）試驗(yàn)，以便根據(jù)參比制劑個(gè)體內(nèi)變異情況，將此類高變異藥物的等效性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作適當(dāng)比例的調(diào)整。
例如：在三周期或四周期試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，若參比制劑兩周期間的個(gè)體內(nèi)變異較大（Swr≥0.294），等效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)將按照 RSABE 法使用試驗(yàn)所得的參比制劑個(gè)體內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差 Swr 值重新計(jì)算，所得范圍將在 80.00%~125.00% 的基礎(chǔ)上適當(dāng)放寬。
一個(gè)品種的個(gè)體內(nèi)變異情況，若無法從文獻(xiàn)中獲取，可以使用上文提及的方法進(jìn)行判斷。上述判斷個(gè)體內(nèi)變異的方式僅為小編從我公司項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析中獲得，如大家有不同的想法或意見，歡迎隨時(shí)和我們交流。
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